巴爾的摩-俄亥俄鐵路博物館（Baltimore & Ohio Railroad Museum），簡稱B&O鐵路博物館，是一座位于馬里蘭州巴爾的摩市的博物館，展示了美國最古老、最著名的鐵路公司之一——巴爾的摩-俄亥俄鐵路公司（B&O Railroad）的歷史和文化。該博物館于1953年開放，占地40英畝，是全美最大的鐵路博物館之一。B&O鐵路博物館的收藏展品包括歷史悠久的鐵路車輛、文物、檔案和藝術品等，其中最為著名的是收藏有美國歷史上首輛商業(yè)化運營的蒸汽機車——“湯姆·索耶號”（Tom Thumb）。此外，博物館還有一個模型鐵路館和一個兒童館，為游客提供了更加深入了解鐵路歷史和文化的機會。每年夏季，博物館還會舉辦“鐵路嘉年華”（Railroad Festival）等活動，吸引了大量游客前來參觀和體驗。B&O鐵路博物館被譽為美國鐵路文化和歷史的寶庫，值得鐵路愛好者和歷史愛好者前來一探究竟。